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細(xì)胞生物學(xué)實驗

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細(xì)胞活力檢測

更新時間：2024-09-26

簡要描述：

細(xì)胞活力檢測
tunel細(xì)胞凋亡檢測服務(wù)利用脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶（TdT）將脫氧核糖核苷酸-熒光素偶聯(lián)物標(biāo)記到DNA缺口的3'-末端。試劑盒提供實驗所需的全套試劑組分以及優(yōu)化的實驗方案，檢測方便，且適用于熒光酶標(biāo)儀、熒光顯微鏡、流式細(xì)胞儀。熒光信號易于被檢測（Ex/Em = 555nm/565 nm）。

　　MTT全稱為3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di- phenytetrazoliumromide，化學(xué)名稱： 3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴鹽，商品名：噻唑藍(lán)。是一種黃顏色的染料。MTT比色法，是一種檢測細(xì)胞存活和生長的方法。其檢測原理為活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶甲瓚（Formazan）并沉積在細(xì)胞中，而死細(xì)胞無此功能。在一定細(xì)胞數(shù)范圍內(nèi)，MTT結(jié)晶形成的量與細(xì)胞數(shù)成正比。二甲基亞砜（DMSO）能溶解細(xì)胞中的甲瓚，用酶聯(lián)免疫檢測儀在490nm波長處測定其光吸收值，可間接反映活細(xì)胞數(shù)量。

　　細(xì)胞凋亡中, 染色體DNA雙鏈斷裂或單鏈斷裂而產(chǎn)生大量的粘性3‘-OH末端，可在脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶（TdT）的作用下，將脫氧核糖核苷酸和熒光素、過氧化物酶、堿性磷酸酶或生物素形成的衍生物標(biāo)記到DNA的3’-末端，從而可進(jìn)行凋亡細(xì)胞的檢測。由于正常的或正在增殖的細(xì)胞幾乎沒有DNA的斷裂，因而沒有3'-OH形成，很少能夠被染色。所以通過TUNEL法，即基因片段末端標(biāo)記（Fragment End Labeling, FragEL）從而可進(jìn)行凋亡細(xì)胞的檢測。

　　TUNEL法細(xì)胞凋亡檢測試劑盒 (橙紅熒光) 利用脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶（TdT）將脫氧核糖核苷酸-熒光素偶聯(lián)物標(biāo)記到DNA缺口的3'-末端。試劑盒提供實驗所需的全套試劑組分以及優(yōu)化的實驗方案，檢測方便，且適用于熒光酶標(biāo)儀、熒光顯微鏡、流式細(xì)胞儀。熒光信號易于被檢測（Ex/Em = 555nm/565 nm）。

　　細(xì)胞活力檢測操作步驟

　　1.收集對數(shù)期細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞懸液濃度，每孔加入100ul,鋪板使待測細(xì)胞調(diào)密度1000- 10000 /孔。

　　2.一定條件培養(yǎng)細(xì)胞適當(dāng)時間，至細(xì)胞單層鋪滿96孔平底板,加入濃度梯度的藥物。

　　3.適當(dāng)條件培養(yǎng)適當(dāng)時間，倒置顯微鏡下觀察。

　　4.每孔加入10ul MTT溶液，繼續(xù)培養(yǎng)1-4h。若藥物與MTT能夠反應(yīng)，可先離心后棄去培養(yǎng)液，小心用PBS沖2-3遍后，再加入含MTT的培養(yǎng)液。

　　5.終止培養(yǎng)，小心吸去孔內(nèi)培養(yǎng)液。

　　6.每孔加入100ul二甲基亞砜，置搖床上低速振蕩10min，使結(jié)晶物充分溶解。在酶聯(lián)免疫檢測儀OD490nm處測量各孔的吸光值。

　　活力計算：

　　細(xì)胞活力（％）=[A(加藥)-A（空白）]/[A（0加藥）-A（空白）]×100

　　A（加藥）：具有細(xì)胞、MTT溶液和藥物溶液的孔的吸光度

　　A（空白）：具有培養(yǎng)基和MTT溶液而沒有細(xì)胞的孔的吸光度

　　A（0加藥）：具有細(xì)胞、MTT溶液而沒有藥物溶液的孔的吸光度

　　細(xì)胞活力：細(xì)胞增殖活力或細(xì)胞毒性活力

　　tunel細(xì)胞凋亡檢測服務(wù)應(yīng)用范圍

　　1.抗腫瘤藥物篩選

　　2.細(xì)胞毒性試驗

　　3.腫瘤放射敏感性測定

　　細(xì)胞活力檢測服務(wù)期限

　　1-2周。

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